近年來(lái)，免疫療法已成為癌癥研究最熱門(mén)的領(lǐng)域之一，能從根本上改變諸多患者的疾病治療方式，常見(jiàn)的幾種免疫療法類(lèi)型包括：
1. 免疫檢查點(diǎn)抑制劑，即阻斷免疫檢查點(diǎn)的藥物。藥物通過(guò)阻斷它們，可以讓免疫細胞對癌癥做出更強烈的反應。常見(jiàn)的免疫檢查點(diǎn)抑制劑藥物能作用于CTLA-4, PD-1等檢查點(diǎn)蛋白。
2. T細胞轉移療法，也可稱(chēng)為過(guò)繼免疫療法或免疫細胞療法，是能增強T細胞抗癌能力的療法。在該療法中，免疫細胞是從患者腫瘤中提取的，最終由靜脈回輸到患者體內。
3. 單克隆抗體或治療性抗體療法，是在實(shí)驗室中創(chuàng )建免疫系統蛋白質(zhì)，旨在按細胞上的特定目標結合。部分單克隆抗體會(huì )標記癌細胞，以便癌細胞能更好地被免疫系統發(fā)現并摧毀。
然而，不論是單抗，還是過(guò)繼性細胞療法，對癌癥細胞的親和力對于治療成功至關(guān)重要。下面我們從三篇文章來(lái)探索一種新的表征親和力，動(dòng)力學(xué)的方法。
抗體和人類(lèi)細胞結合的親和力動(dòng)力學(xué)表征
鏈接：https://doi.org/10.3390/ijms19103089
摘要：
白細胞介素23/白細胞介素17(IL-23/IL-17)促炎軸在幾種慢性自身免疫性疾病的發(fā)病機制中起著(zhù)關(guān)鍵作用。Th17細胞的激活途徑刺激多種炎癥基因的轉錄，導致炎癥介質(zhì)的分泌。
諾華國際AG產(chǎn)品，人單克隆抗體蘇金單抗(Cosentyx), 靶向人IL-17A的細胞因子，可用于治療銀屑病，強直性脊柱炎和牛皮癬性關(guān)節炎。雖然基于單抗的生物制劑仍然是藥物開(kāi)發(fā)的主要路線(xiàn)，但通過(guò)定向進(jìn)化方法產(chǎn)生的源自小蛋白結構域支架的非免疫球蛋白結合蛋白作為下一代治療方法備受關(guān)注。
在這項工作中，我們使用ABD衍生的高度復雜的組合文庫來(lái)生成一組獨特的針對人IL-17受體A的高親和力結合蛋白。我們選擇了已發(fā)現序列家族的7個(gè)代表，并證明其中5個(gè)可溶性IL-17RA-IgG嵌合體并與表達IL-17RA的THP-1細胞結合。與通過(guò)計算機對接預測的阻斷功能相關(guān)，這些變體抑制了IL-17A細胞因子與重組IL-17RA結合，并表現在體外正常人皮膚成纖維細胞上證明的免疫抑制潛力。因此，我們致力于開(kāi)發(fā)可作為獨特的IL-17RA拮抗劑靶向IL-23/IL-17促炎軸的新型非IgG免疫調節劑。
ARS變體與人類(lèi)細胞的結合，結合動(dòng)力學(xué)和親和力
通過(guò)流式細胞術(shù)在用抗人IL-17RA抗體染色THP-1細胞時(shí)得到證實(shí)(圖1)。然而，我們需要明確人THP-1細胞結合的五種ARS變體的結合參數。如圖2所示，使用了貼壁表達 IL-17RA 的人角質(zhì)形成細胞 HaCaT 細胞。在通過(guò)二級鏈霉親和素-APC 偶聯(lián)物檢測到細胞表面結合的 ARS 蛋白后，使用Ligandtracer Green確定實(shí)時(shí)熒光模式下的結合親和力和速率動(dòng)力學(xué)。為了獲得結合曲線(xiàn)，我們使用了每種 ARS 蛋白的三種濃度（3 nM、30 nM 和 90 nM），并通過(guò)在缺乏 ARS 結合劑的培養基中進(jìn)行測量來(lái)評估飽和后的速率動(dòng)力學(xué)。如圖2所示，觀(guān)察到 ARS014 和 ARS019 變體從細胞表面非常緩慢地釋放。這表明高親和力結合并對應于 Trace Drawer 軟件計算的值，分別為 ARS014 的Kd = 2 nM 和 ARS019 的 0.7 nM。使用這種方法，我們還分別估計了 ARS004 (1.2 nM)、ARS012 (35 nM) 和 ARS043 (32 nM) 的Kd值。
圖1 ARS變體結合在THP-1細胞
圖2使用Ligandtracer Green確定ARS014和ARS019結合在HaCaT細胞的親和力，動(dòng)力學(xué)。
CAR-T 細胞療法
目前最火熱的細胞療法莫過(guò)于CAR-T，T細胞需要適當的腫瘤特異性，足夠的數量，并且克服局部免疫抑制，才能發(fā)揮。
用新的方法定義過(guò)繼性T細胞的親和力特性
鏈接：https://doi.org/10.1186/s12865-016-0162-z
摘要：
對自體T細胞進(jìn)行基因編輯，并輸入病人體內，正在成為一種成功的癌癥療法。編輯過(guò)的細胞的親和力對于治療成功至關(guān)重要。
病毒特異性T細胞具有高親和力(通常在nM范圍內)，而針對人體自身蛋白質(zhì)的T細胞由于胸腺中高親和力克隆的缺失而導致低親和力，進(jìn)而避免針對自身組織和自身免疫。我們已經(jīng)克隆了兩個(gè)TCR，一個(gè)TCR識別來(lái)自前列腺和乳腺癌相關(guān)抗原TARP的HLA-A2限制性肽。一個(gè)TCR識別來(lái)自巨細胞病毒(CMV)pp65抗原的HLA-A2憲制性肽。這些TCR是并排比較的。由于TARP是一種在前列腺癌細胞中高度表達的抗原，因此有可能用于臨床。因此，表征他的親和力，以及功能，為有效性和安全性提供基本的信息。
Ligand Tracer? 測量 T 細胞與靶細胞的結合
2 ml 培養基中的100萬(wàn)個(gè)mel526 靶細胞粘附在傾斜的 10 cm 培養皿上過(guò)夜。然后將培養皿插入 Ligand Tracer?儀器（Ridgeway Instruments AB，烏普薩拉，瑞典）的傾斜旋轉平臺上，并在旋轉 (1 rpm) 間歇性實(shí)時(shí)進(jìn)行熒光背景測量 30 分鐘。用羧基熒光素琥珀酰亞胺酯 (CFSE) 標記轉導和擴增的 TCR 工程 T 細胞，然后用含血清的培養基徹底清洗。然后將 CFSE 標記的 TCR 工程化 T 細胞（1.5 × 10 5細胞）添加到帶靶細胞的培養皿中。再次開(kāi)始旋轉，通過(guò)檢測來(lái)自靶細胞的熒光信號（T 細胞結合）并減去來(lái)自培養皿另一側的熒光信號，實(shí)時(shí)測量 T 細胞與靶細胞的結合（結合）。90 分鐘后，再加入 3 × 10^5個(gè) T 細胞并繼續測量。
人乳頭瘤病毒引起的癌癥免疫治療最新進(jìn)展
鏈接：https://doi.org/10.1111/imm.13285
摘要：
人類(lèi)乳頭瘤病毒(HPV)的是生殖器癌癥的主要誘因，比如宮頸癌，還有頭，頸癌等。盡管預防性疫苗可以顯著(zhù)對抗HPV，然而HPV誘導的惡性腫瘤依然是威脅健康的罪魁禍首。這里，我們對相關(guān)研究以及臨床試驗進(jìn)行匯總，總結了免疫抑制劑，治療型疫苗，基因編輯手段，以及自體T細胞治療。特別是靶向性的工程化TCR T 細胞，得到了令人鼓舞的結果，并在治療HPV+-侵染的癌癥病人身上有了顯著(zhù)的效果。
圖3 用于治療HPV相關(guān)癌癥的免疫治療方法
工程化 TCR T 細胞的結構親合力表征
在有證據表明工程化 TCR T 細胞能夠識別 MHC I 類(lèi)目標表位后，必須測量它們的結構親和力。Nauerth 等人描述了一種可以定量測量動(dòng)態(tài)解離（Koff率）的方法。該檢測基于可逆鏈球菌，包括工程化鏈霉親和素（稱(chēng)為 Strep-Tactin ?）和對 Strep-Tactin 具有高親和力的小肽（Strep-tags ?），這些小肽與所研究的表位的熒光標記單體相關(guān)聯(lián)。
還可以使用 LigandTracer ?儀器（Ridgeway Instruments AB）分析工程化 TCR T 細胞與靶細胞的結合。LigandTracer?實(shí)時(shí)檢測標記分子與細胞的相互作用。該儀器有一個(gè)傾斜的旋轉平臺，盤(pán)子放置在該平臺上。在培養皿的一側，目標細胞被固定并用所需的肽脈沖。將培養皿置于旋轉支架上，測量背景熒光。然后，將用羧基熒光素琥珀酰亞胺酯標記的工程化 TCR T 細胞添加到培養皿的另一側。旋轉開(kāi)始，T 細胞與靶細胞的結合是通過(guò)從沒(méi)有靶細胞的平板一側減去靶細胞一側的熒光信號來(lái)測量的。
LigandTracer Green
LigandTracer Green來(lái)自瑞典，產(chǎn)品主要特點(diǎn)是：
1. 實(shí)時(shí)監控蛋白質(zhì)－細胞相互作用的動(dòng)態(tài)；
2. 直接描繪動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)，得到親和力，平衡解離常數Ka,Kd,KD，以及結合模式(1:1 or 1:2, 2:1)；
3. 不同熒光標記可以通過(guò)更換檢測器實(shí)現檢測；
4，價(jià)格合理，免維護，和低運行成本。
覆蓋受體包括：貼壁細胞，懸浮細胞，細菌，組織，蛋白質(zhì)等；
配體涵蓋：抗體，蛋白質(zhì)，多肽，納米粒子，病毒，細菌和細胞等。
