CUY21為全球的轉基因研究開(kāi)創(chuàng )了諸多全新方向。最新款CUY21EDITII采用先進(jìn)的脈沖芯片控制技術(shù)，BEX的多步脈沖、反向脈沖及恒流脈沖轉化模式，無(wú)需任何專(zhuān)用試劑，提供高效高存活率的轉化。
細胞的高效轉染，尤其適合于原代細胞、免療細胞、干細胞等難轉染細胞的高效高存活率轉化
在體/離體受精卵CRISPR/Cas9高效基因編輯
體內基因轉染(in-utero，in-vivo，in-ovo)
體外基因轉染(ex-ovo，ex-vivo)
貼壁細胞基因轉染
1.先進(jìn)組合脈沖技術(shù)，針對不同樣品皆可提供完美的轉化效果，真正一機多能。
高壓瞬時(shí)穿孔脈沖+低壓導入脈沖(動(dòng)態(tài)衰減/靜態(tài)衰減)+反轉脈沖。主要用于懸浮和貼壁細胞的基因轉染。
1.2 Square(V)方波電壓模式：
釋放方波脈沖，主要用于活體轉基因。
1.3 Sauare(mA)恒流方波模式：
恒流脈沖是突破性的脈沖技術(shù)，可滿(mǎn)足極其脆弱組織或細胞的高效基因轉染。
小鼠在體受精卵CRISPR/CAS9基因編輯是目前全新的研究方向，利用恒流轉化模式可以獲得高生存率和高轉化效率的實(shí)驗結果。
2.無(wú)需任何額外的轉染試劑
3.大屏幕直觀(guān)設定轉化參數，并實(shí)時(shí)監測顯示實(shí)際實(shí)驗數據
CUY21EDIT II獨有的恒流轉化模式，發(fā)明了受精卵在體輸卵管轉化(i-GONAD法)。這一方法的出現，較之上面的離體受精卵基因編輯方法又有了突破性進(jìn)展。
應用案例
為了鑒定參與外胚層譜系形成的BET蛋白，我們分析了缺乏Brd4、Brd2和雙突變體的突變胚胎。只有在Brd4/Brd2雙缺陷桑椹胚中，NANOG陽(yáng)性外胚層細胞的消失才明顯。因此，JQ1處理的胚胎的表型不是通過(guò)Brd4-或Brd2單缺陷而復制的，而是僅通過(guò)Brd4/Brd2雙缺陷復制的，證明了Brd2和Brd4在外胚層譜系的重要作用[1]。
為了獲得基因敲除胚胎，使用CUY21 EDITII、GE-101鉑板電極（長(cháng)10 mm，寬3 mm，高0.5 mm，間隙1 mm）和GE-1電極夾（日本東京BEX有限公司）對Brd2tg/tg卵母細胞進(jìn)行電穿孔得到。
CUY21EDITII電轉儀通過(guò)對外泌體囊泡施加適當的電流擊穿形成囊泡微孔，藥物通過(guò)形成微孔加載到外泌體中，外泌體膜隨后會(huì )很快恢復完成封裝。CUY21EDIT II獨特的動(dòng)態(tài)衰減脈沖技術(shù)及恒流電阻測定技術(shù)使轉染過(guò)程中電流輸出更穩定，從而高效封裝藥物載入外泌體中。
應用案例
MicroRNA（miRNA）是關(guān)鍵生物過(guò)程中基因表達的重要調節因子，是糖尿病傷口治療領(lǐng)域的一種有前景的核酸藥物。在Chengqi Yan等人的研究中使用牛奶來(lái)源的外泌體作為miR-31-5p遞送的新系統，并通過(guò)CUY21EDIT II (BEX, Japan) 電轉儀電穿孔成功地將miR-315P模擬物封裝到牛奶外泌體內。該研究證明了加載在外泌體中的miR-31-5p實(shí)現了更高的細胞攝取并能夠抵抗降解并且miRNA-外泌體在體外顯著(zhù)改善了內皮細胞功能，同時(shí)在體內促進(jìn)血管生成和增強糖尿病傷口愈合[2]。
應用案例
盡管存在有效的抗病毒治療，但沒(méi)有治愈或預防性疫苗，HIV-1仍然是世界范圍內的一個(gè)主要公共衛生問(wèn)題。病毒感染與宿主特異性免疫的許多逃逸機制有關(guān)，而且保護的相關(guān)性仍然不完全清楚。受減毒活病毒療效的啟發(fā)，Leroy等人已經(jīng)開(kāi)發(fā)了一種創(chuàng )新的DNA 疫苗 CAL-SHIV-IN-IRES IL-7和 CAL-SHIV-IN-IRES IL-15。
我們將兩種DNA 疫苗 CAL-SHIV-IN-IRES IL-7和 CAL-SHIV-IN-IRES IL-15通過(guò)皮內注射＋電穿孔（使用CUY21EDIT II (BEX, Japan) 電轉儀和 10 mm 直徑的LF567電極進(jìn)行電穿孔）以及肌肉注射 (IM)聯(lián)合免疫BALB/cJ 小鼠和恒河猴，檢測兩種共同注射的DNA 疫苗在小鼠和恒河猴體內的免疫原性，并將免疫應答與親本疫苗 CAL-SHIV-IN-產(chǎn)生的免疫應答進(jìn)行了比較。這種聯(lián)合免疫在小鼠和恒河猴體內都引發(fā)了有效的疫苗特異性 CD4和 CD8T 細胞。免疫后40周，恒河猴的血漿和粘膜隔室均檢測到 ADCC作用(ADCC)抗體，并被細胞因子增強[3]。
參考文獻：
[1] Tsume-Kajioka M, Kimura-Yoshida C, Mochida K, Ueda Y, Matsuo I. BET proteins are essential for the specification and maintenance of the epiblast lineage in mouse preimplantation embryos[J]. BMC Biol, 2022,20(1):64-70.
[2] Yan C, Chen J, Wang C, et al. Milk exosomes-mediated miR-31-5p delivery accelerates diabetic wound healing through promoting angiogenesis[J]. Drug Deliv, 2022,29(1):214-228.
[3] Leroy LA, Mac Donald A, Kandlur A, Bose D, Xiao P, Gagnon J, Villinger F, Chebloune Y. Cytokine Adjuvants IL-7 and IL-15 Improve Humoral Responses of a SHIV LentiDNA Vaccine in Animal Models[J]. Vaccines (Basel), 2022, 10(3):461-483.
