標題：Net decrease in spine-surface GluA1-containing AMPA receptors after post-learning sleep in the adult mouse cortex
譯名：在學(xué)習后睡眠可使成年小鼠皮質(zhì)后含有脊柱表面Glua1的含量減少。
作者：Miyamoto, D.等
時(shí)間：2021-05-17
期刊：Nature communications
影響因子：14.9
DOI：10.1038/s41467-021-23156-2
摘要：睡眠有益于學(xué)習和記憶的機制尚不清楚。睡眠可以進(jìn)一步加強通過(guò)學(xué)習增強的突觸，或促進(jìn)廣義突觸減弱，同時(shí)保護新增強的突觸。我們通過(guò)結合鞏固與睡眠依賴(lài)的運動(dòng)任務(wù)，突觸AMPA受體可塑性的標志物以及重復的雙光子成像來(lái)測試這些想法，以跟蹤體內具有單脊柱分辨率的數百根脊柱。在小鼠運動(dòng)皮層中，睡眠導致在學(xué)習之前和之后，脊柱表面含有GluA1的AMPA受體的整體凈減少。學(xué)習后睡眠期間單棘的分子變化與睡眠后表現的變化相關(guān)。與睡眠剝奪相比，學(xué)習導致GluA1表達最大增加的棘刺在學(xué)習后睡眠后具有相對優(yōu)勢，因為睡眠會(huì )削弱所有剩余的脊柱。這些結果在成年小鼠中獲得，表明睡眠依賴(lài)性突觸向下選擇也有利于大腦的成熟。
推薦語(yǔ): 學(xué)習和誘導的增強與AMPA受體的數量和活性的持續增加有關(guān)。實(shí)現該過(guò)程的一個(gè)關(guān)鍵步驟是在突觸后膜中摻入含GluA1的AMPA受體，本文中正是使用BEX CUY21進(jìn)行小鼠胚胎的子宮電穿孔（E=14.5）以進(jìn)行后續成像觀(guān)察。
標題：Creation of CRISPR-based germline-genome-engineered mice without ex vivo handling of zygotes by i-GONAD
譯名：無(wú)需離體處理受精卵通過(guò)i-GONAD創(chuàng )建基于CRISPR的基因組工程小鼠
作者：Gurumurthy Channabasavaiah B.等
時(shí)間：2019-07-24
期刊：Nature protocols
影響因子：13.4
DOI：10.1038/s41596-019-0187-x
摘要：創(chuàng )建基因工程小鼠的方法涉及三個(gè)主要步驟：從雌鼠中收獲胚胎，將試劑顯微注射到離體胚胎中，并將其手術(shù)轉移到另一組雌鼠。三十多年來(lái)一直使用這些方法該創(chuàng )建小鼠模型。我們最近開(kāi)發(fā)了一種名為GONAD（通過(guò)輸卵管核酸遞送進(jìn)行基因組編輯）的方法，該方法繞過(guò)了這些步驟。在小鼠受孕后1.5 d將CRISPR組分（Cas9 mRNA和引導RNA（gRNA））注射到懷孕女性的輸卵管中，然后進(jìn)行體內電穿孔以將組分原位遞送到受精卵中。使用GONAD，我們證明了靶基因可以在小鼠胚胎發(fā)育的不同階段進(jìn)行編輯。隨后，我們通過(guò)遞送CRISPR核糖核蛋白（RNPs;Cas9蛋白或Cpf1蛋白和gRNA）進(jìn)入孕0.7天小鼠體內，這使得它適用于生成常規敲除和大缺失小鼠模型。當提供單鏈DNA（ssDNA）修復模板時(shí)，i-GONAD還可以生成包含高達1kb插入片段的敲入模型。i-GONAD還有其他優(yōu)點(diǎn)：它不需要輸精管切除術(shù)的雄性和假孕雌性，用于i-GONAD的雌性不會(huì )被犧牲，可用于其他實(shí)驗，它可以很容易地在缺乏復雜顯微注射設備的實(shí)驗室中采用，并且可以由熟練的小動(dòng)物手術(shù)但缺乏胚胎處理技能的研究人員實(shí)施。文中我們提供了用于建立i-GONAD的方法。
推薦語(yǔ): CRISPR動(dòng)物基因組工程廣泛應用于研究中，該方法包括三個(gè)主要步驟：受精卵的分離，顯微注射，以及將顯微注射的受精卵轉移到假懷孕雌性的輸卵管中。GONAD技術(shù)使用CUY21直接輸卵管上對受精卵進(jìn)行原位電穿孔，生產(chǎn)基因組編輯小鼠，成功簡(jiǎn)化了CRISPR動(dòng)物基因組工程的三大步驟。CUY21獨特的恒流技術(shù)更是進(jìn)一步保證實(shí)驗的重復性及成功率。
